Recomendaciones metodológicas para el monitoreo molecular BCR-ABL1 en pacientes con leucemia mieloide crónica por pcr cuantitativa en tiempo real / Guidelines for molecular monitoring of BCR-ABL1 in chronic myeloid leukemia patients by RT-qPCR

Actualmente las guías clínicas para el manejo de pacientes con leucemia mieloide crónica incluyen el monitoreo molecular de BCR-ABL1 por PCR cuantitativa en tiempo real; esta metodología permite definir la respuesta molecular. A pesar de la probada importancia pronóstica de la respuesta molecular, en muchos casos no se tiene en cuenta que la PCR cuantitativa puede producir datos muy variables, que pueden afectar la validez de los resultados, y hacer difícil la comparación entre diferentes laboratorios. Por lo tanto, para un manejo clínico óptimo, es absolutamente necesaria la estandarización de las metodologías de medición de BCR-ABL1. La estrategia para obtener valores de BCR-ABL1 comparables consiste en la adopción de la escala internacional. La conversión a la escala internacional se logra mediante la aplicación de un factor de conversión específico para cada laboratorio; este factor de conversión se puede obtener mediante el uso de calibradores secundarios validados, que hoy se producen en Argentina, en el marco del programa nacional de armonización. Por otra parte, con el objetivo de mitigar las diferencias entre laboratorios y facilitar criterios uniformes en la interpretación de los resultados y presentación de los informes, decidimos preparar estas guías de laboratorio. Esto permitirá además a los laboratorios poder evaluar su calidad de trabajo, tarea muy importante, en particular para aquellos centros más aislados, que no tienen fácil acceso a costosos kits comerciales o programas internacionales de intercambio de muestras.

Current clinical guidelines for managing chronic myeloid leukemia include molecular monitoring of BCR-ABL1 transcript quantitative reverse-transcription PCR. Despite the proven prognostic significance of molecular response, it is not widely appreciated that quantitative reverse-transcription PCR potentially produces highly variable data, which may affect the validity of results, making comparability between different laboratories difficult. Therefore, standardized reporting of BCR-ABL1 measurements is needed for optimal clinical management. An approach to achieve comparable BCR-ABL1 values is the use of an international reporting scale. Conversion to the international scale is achieved by the application of laboratory specific conversion factor that is obtained by using validated secondary reference calibrators. Moreover, with the aim to mitigate the interlaboratory imprecision of quantitative BCR-ABL1 measurements and to facilitate local laboratory results interpretation and reporting, we decide to prepare laboratory guidelines that will further facilitate interlaboratory comparative studies and independent quality-assessment programs, which are of paramount importance for worldwide standardization of BCR-ABL1 monitoring results, in particular for those most isolated laboratories, with not easy access to commercial kits or sample interchange programs.

Evaluación del Sistema Cobas Ampliprep/Cobas Amplicor HIV-1 Monitor tm test 1.5 en plasma seminal / Evaluation of the Cobas Ampliprep/Cobas Amplicor HIV-1 Monitor tm test 1.5 system in sperm samples

La determinación de la carga viral de HIV y la detección del ADN proviral en semen se utilizan en protocolos de fertilización para parejas discordantes (hombre HIV positivo - mujer AMPLICOR HIV-1 MONITOR tm Test versión 1.5 (Roche) en plasma seminal para estimar la carga viral. Se procesaron 31 muestras de plasma seminal, diluidas y sin diluir para evaluar la amplificación del control interno y descartar posibles inhibiciones. Luego se contaminaron 22 muestras con plasma de pacientes HIV positivos para verificar la cuantificación del ARN viral. Finalmente, se procesaron 12 muestras en paralelo por Nuclisens HIV-1 QT (Biomerieux) para descartar potenciales falsos negativos. Concluimos que el sistema evaluado es un método adecuado para cuantificar ARN viral en plasma seminal. No se observó inhibición, ni falsos negativos y los valores de carga viral y el límite de detección no se vieron modificados por la matriz diferente.

Analyses of the HIV load and presence of proviral DNA in sperm samples are used in assisted fertilization protocols for discordant couples (infected man-healthy woman). We evaluated the use of the COBAS Ampliprep/COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR tm Test versión 1.5 (Roche) for viral load quantification in seminal plasma samples. We first tested 31 sperm samples for amplification of the internal control to discard potential inhibition. Seminal plasmas were analyzed directly and diluted. We then spiked 21 sperm samples with human plasma from HIV-positive patients to confirm that HIV RNA could be amplified. We also compared the results of 12 samples with NASBA (Nuclisens HIV-1 QT, Biomerieux), and confirmed lack of false negative results. We conclude that the new assay is an adequate methodology to analyze HIV load in sperm samples. We did not observed inhibition, neither false negative results and quantification demonstrated equivalent HIV loads.

Cross-linking corneal / Corneal cross-linking

El Crosslinking corresponde a la generación de nuevos enlaces entre las cadenas colágenas del estroma anterior corneal mediante fotomediador, la riboflavina y la irradiación con luz UV-A. La aplicación del CXL da a lugar a la aparición de una nueva proteína colágena remarcablemente estable, resistente a la desnaturalización por calor, mercaptoetanol y pepsina, con un diámetro aumentado y mayor fuerza tensil. El proceso da a lugar a una cornea con mayor resistencia al estiramiento, incrementando la estabilidad mecánica y bioquímica del tejido corneal, deteniendo el curso natural de patologías corneales progresivas. Además, se asocia a una mejoría en la agudeza visual de los pacientes tratados con y sin corrección especialmente apreciable a partir del tercer mes postoperatorio. Estas mejorías pueden ser modestas y no encontrarse en todos los casos. La indicación principal del CXL corresponde a los queratoconos iniciales (tipo 1 y 2 de la clasificación de Krumeich) y aquellos que hayan sufrido empeoramiento en los últimos seis meses. Es también útil en la cirugía corneal refractiva para el tratamiento de la queractasia iatrogénica del LASIK (láser in situ keratomileusis). Una nueva aplicación corresponde a la terapia de los meltings corneales por queratitis microbianas no respondedoras al tratamiento medico. El principal efecto secundario advertido, ha sido el edema (opacidad) estromaltransitorio o haze, con aparición entre los tres y seis meses manejado exitosamente dexametasona tópica por un mes. La presencia de prominentes estrías de Vogt preoperatorias y de microestrías hipodensas a la microscopia confocal especialmente aquellas con patrón reticular con o sin estrías de Vogt (el patrón reticular podría representar un signo de queratocono avanzado) se postulan como una posible causa de opacidad corneal post operatoria y cicatrices estromales tardías. En pacientes con ectasia post LASIK, el CXL se puede asociar a queratitis difusa lamelar...

In acute lymphoblastic leukemia deletion of the tumor suppressor gene P16 is associated with abnormal interferon genes

The putative tumor-suppressor gene p16 was mapped to human chromosome 9p21, close to the interferon alpha cluster. The frequency and association of gene alterations of p16, interferon alpha and interferon beta were investigated in a total of 39 Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) patients. Of these, 10 patients (25.6 per cent) presented abnormalities of at least one of the three genes studied. In 32 ALL cases studies of the three genes could be accomplished. In 23 out of 32 ALL cases the 3 genes studied were normally preserved. In the remaining 9 ALL, p16 was affected in 8 cases by homozygous deletions. In 2 patients, p16 deletion was associated with homozygous deletions for interferon alpha and interferon beta genes and in 1 case with total deletion of interferon beta 1 gene and partial deletion of interferon alpha. In the remaining 5 cases, p16 was the only gene deleted with no alteration of type interferon genes. These data indicate that p16 gene is deleted in a higher frequency than type I interferon genes in ALL. Moreover, within the ALL group with p16 gene deletion, 37.5 per cent are associated with interferon deletions and in general, ALL with alpha and/or beta interferon gene deletions are associated with p16 deletions. Therefore, p16 gene deletion with preserved type I interferon genes in some ALL suggests that the absence of this cdk inhibitor may disturb the normal cell cycle and favor blast transformation.

Estudios citogenéticos en tumores del sistema nervioso / Cytogenetic studies in tumors of the nervous system

Se presenta el estudio citogenético efectuado en 3 pacientes con tumores del sistema nervioso: 2 astrocitomas grado III y un neuroblastoma estadio I. Los dos primeros mostraron una distribución bimodal en tanto que el neuroblatoma presentó un número modal diploide. En los 3 casos se encontraron alteraciones cromosómicas clonales, observándose los marcadores i(lq), 9p+, 3p+, dicéntricos y un metacéntrico pequeño de origen desconocido en gliomas. En el neuroblastoma se observó el marcador 11p+. Los dos astrocitomas presentaron cromosomas dobles diminutos (DM), fenómeno indicador de amplificación génica que correlaciona con el estadio avanzado de la enfermedad. Las anormalías numéricas clonales fueron trisomías 16 y 18 en los gliomas y monosomía 15 en el neuroblastoma